{"id":4903,"date":"2024-01-15T06:33:58","date_gmt":"2024-01-15T06:33:58","guid":{"rendered":"https:\/\/corp.farlong.com\/protective-effect-of-tisochrysis-lutea-on-dry-eye-syndrome-via-nf-%ce%bab-inhibition\/"},"modified":"2024-01-27T10:30:56","modified_gmt":"2024-01-27T10:30:56","slug":"protective-effect-of-tisochrysis-lutea-on-dry-eye-syndrome-via-nf-%ce%bab-inhibition","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/directcm.com\/fr\/protective-effect-of-tisochrysis-lutea-on-dry-eye-syndrome-via-nf-%ce%bab-inhibition\/","title":{"rendered":"Effet protecteur de Tisochrysis lutea sur le syndrome de l&#039;\u0153il sec via l&#039;inhibition de NF-\u03baB"},"content":{"rendered":"<div id=\"Sec13-content\">\n<h3 id=\"Sec14\" class=\"c-article__sub-heading\">Mat\u00e9riaux<\/h3>\n<h4 id=\"Sec15\" class=\"c-article__sub-heading c-article__sub-heading--small\">Mat\u00e9riaux in vivo\/in vitro<\/h4>\n<p><i>T. lutea<\/i> a \u00e9t\u00e9 obtenu aupr\u00e8s de Microalgae Ask Us Corp. (Gangneung, Cor\u00e9e). La scopolamine, la fluoresc\u00e9ine, l&#039;h\u00e9matoxyline et l&#039;\u00e9osine (H&amp;E) ont \u00e9t\u00e9 achet\u00e9es chez Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA) pour des exp\u00e9rimentations animales. Le milieu de Eagle modifi\u00e9 de Dulbecco (DMEM): F12, la solution saline tamponn\u00e9e au phosphate de Dulbecco (DPBS), le s\u00e9rum de veau f\u0153tal (FBS) et la solution de trypsine-EDTA 0, 251 TP3T ont \u00e9t\u00e9 obtenus aupr\u00e8s de Life Technologies (Carlsbad, CA, USA). Une solution antibiotique, comprenant 10 000 U\/mL de p\u00e9nicilline et 10 000 \u00b5g\/mL de streptomycine, a \u00e9t\u00e9 achet\u00e9e aupr\u00e8s de Hyclone Laboratories Inc. (South Logan, UT, USA). Le TNF-\u03b1 humain recombinant a \u00e9t\u00e9 obtenu aupr\u00e8s de syst\u00e8mes de R&amp;D (Minneapolis, MN, USA). Les anticorps primaires, notamment la kinase r\u00e9gul\u00e9e par le signal extracellulaire (ERK), la kinase N-terminale anti-c-jun (JNK), l&#039;anti-p38, l&#039;anti-\u03b1-tubuline et l&#039;anti-\u03b2-actine, ont \u00e9t\u00e9 achet\u00e9s aupr\u00e8s de Santa Cruz Biotechnology ( Santa Cruz, Californie, \u00c9tats-Unis). D&#039;autres anticorps primaires et des anticorps secondaires conjugu\u00e9s \u00e0 la peroxydase de raifort (HRP) ont \u00e9t\u00e9 obtenus aupr\u00e8s de Cell Signaling Technology, Inc (Beverly, MA, USA). Des produits chimiques, notamment le bromure de 3\u20134,5-dim\u00e9thylthiazol-2-yl)-2,5-diph\u00e9nylt\u00e9trazolium (MTT), ont \u00e9t\u00e9 achet\u00e9s aupr\u00e8s de Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA).<\/p>\n<h3 id=\"Sec16\" class=\"c-article__sub-heading\">Mat\u00e9riel d&#039;analyse chimique<\/h3>\n<p>Les AGPI ont \u00e9t\u00e9 identifi\u00e9s \u00e0 l&#039;aide d&#039;une solution contenant 37 substances standard d&#039;AGPI, achet\u00e9e aupr\u00e8s de Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA). L&#039;acide val\u00e9rique a \u00e9t\u00e9 obtenu aupr\u00e8s de Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA) pour \u00eatre utilis\u00e9 comme \u00e9talon interne. Solvants, y compris une solution m\u00e9thanolique de trifluorure de bore, <i>n<\/i>-hexane, Na<sub>2<\/sub>DONC<sub>4<\/sub>, CH<sub>3<\/sub>Cl, MeOH et NaCl, utilis\u00e9s pour extraire les AGPI de <i>T. lutea<\/i> ont \u00e9t\u00e9 achet\u00e9s chez Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA).<\/p>\n<h3 id=\"Sec17\" class=\"c-article__sub-heading\">D\u00e9claration \u00e9thique<\/h3>\n<p>Cette recherche a \u00e9t\u00e9 approuv\u00e9e par le Comit\u00e9 institutionnel de protection et d&#039;utilisation des animaux (IACUC) de l&#039;Institut cor\u00e9en des sciences et technologies (KIST) : KIST n\u00b0 2020-002, Gangneung Institute, et a fait suite \u00e0 la d\u00e9claration de l&#039;Association pour la recherche en vision et en ophtalmologie sur le Utilisation d&#039;animaux dans la recherche ophtalmique et visuelle. De plus, nous suivons les recommandations de Animal Research: Reporting of In Vivo Experiments (ARRIVE). Toutes les proc\u00e9dures ont \u00e9t\u00e9 men\u00e9es conform\u00e9ment aux r\u00e9glementations et directives applicables.<\/p>\n<h3 id=\"Sec18\" class=\"c-article__sub-heading\">Exp\u00e9riences animales et induction du mod\u00e8le DES<\/h3>\n<p>Les souris ont \u00e9t\u00e9 h\u00e9berg\u00e9es dans une salle d&#039;animaux climatis\u00e9e et maintenues \u00e0 22 \u00b0 C \u00b1 2 \u00b0 C, \u00e0 une humidit\u00e9 de 501 TP3T \u00b1 101 TP3T et \u00e0 un cycle circadien de 12 h de lumi\u00e8re \/ 12 h d&#039;obscurit\u00e9. La nourriture et l&#039;eau \u00e9taient fournies ad libitum. Les souris ont \u00e9t\u00e9 acclimat\u00e9es pendant une semaine avant d&#039;\u00eatre divis\u00e9es au hasard en cinq groupes de sept souris BALB\/c m\u00e2les \u00e2g\u00e9es de 6 semaines (Orientbio, Gyunggi-do, Cor\u00e9e). Le DES a \u00e9t\u00e9 induit exp\u00e9rimentalement chez des souris deux fois par jour par injection intrap\u00e9riton\u00e9ale de 200 \u03bcL (2,5 mg\/mL) de scopolamine dilu\u00e9e dans une solution saline tamponn\u00e9e au phosphate (PBS ; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA). <i>T. lutea<\/i> a \u00e9t\u00e9 administr\u00e9 quotidiennement par voie orale \u00e0 des groupes de souris \u00e0 des concentrations de 0 (v\u00e9hicule t\u00e9moin), 100, 150 ou 300 mg\/kg dans 200 \u03bcL d&#039;eau distill\u00e9e. Le groupe t\u00e9moin a re\u00e7u du PBS sans scopolamine. Quand <i>T. lutea<\/i> a \u00e9t\u00e9 administr\u00e9 par voie orale, 200 \u03bcL d\u2019eau distill\u00e9e ont \u00e9t\u00e9 utilis\u00e9s dans le groupe t\u00e9moin et DES. La production de larmes a \u00e9t\u00e9 quantifi\u00e9e apr\u00e8s deux semaines \u00e0 l&#039;aide d&#039;une bandelette de test de Schirmer standard plac\u00e9e dans le tiers inf\u00e9rieur de la paupi\u00e8re temporale avant de fermer l&#039;\u0153il pendant 1 min. La bandelette a ensuite \u00e9t\u00e9 retir\u00e9e et la longueur du point humide en millim\u00e8tres a \u00e9t\u00e9 mesur\u00e9e pour d\u00e9terminer la valeur du test de Schirmer. La coloration de la surface corn\u00e9enne a \u00e9t\u00e9 utilis\u00e9e pour d\u00e9terminer l&#039;\u00e9tendue des modifications de la surface corn\u00e9enne. La surface corn\u00e9enne a \u00e9t\u00e9 observ\u00e9e et not\u00e9e apr\u00e8s injection d&#039;une goutte de fluoresc\u00e9ine 3% dans la conjonctivale lat\u00e9rale inf\u00e9rieure. La coloration corn\u00e9enne a \u00e9t\u00e9 \u00e9valu\u00e9e \u00e0 l&#039;aveugle. Les souris ont \u00e9t\u00e9 euthanasi\u00e9es par luxation cervicale. Les corn\u00e9es ont \u00e9t\u00e9 retir\u00e9es en effleurant la paupi\u00e8re de la souris et en utilisant une pince pour couper le nerf optique du globe oculaire et retirer la corn\u00e9e. Le cristallin a \u00e9t\u00e9 retir\u00e9 de la corn\u00e9e et conserv\u00e9 \u00e0 - 80 \u00b0 C. La glande lacrymale a \u00e9t\u00e9 retir\u00e9e de la m\u00e2choire inf\u00e9rieure de la souris \u00e0 l&#039;aide de pinces et l&#039;\u00e9piderme de la zone tir\u00e9e a \u00e9t\u00e9 coup\u00e9 pour r\u00e9v\u00e9ler la moiti\u00e9 inf\u00e9rieure du visage. La glande lacrymale proche de la m\u00e2choire inf\u00e9rieure a \u00e9t\u00e9 s\u00e9curis\u00e9e et retir\u00e9e puis conserv\u00e9e \u00e0 -80 \u00b0C \u00e0 l&#039;abri de la lumi\u00e8re.<\/p>\n<h3 id=\"Sec19\" class=\"c-article__sub-heading\">Histologie<\/h3>\n<p>Les tissus de l&#039;\u00e9piderme corn\u00e9en et des glandes lacrymales ont \u00e9t\u00e9 collect\u00e9s et fix\u00e9s dans du formald\u00e9hyde 10%, suivis d&#039;un traitement pour inclusion et section en paraffine. Les coupes ont \u00e9t\u00e9 color\u00e9es avec H&amp;E et examin\u00e9es avec un grossissement de 40 \u00d7 \u00e0 l&#039;aide d&#039;un microscope (TE-2000U, Nikon, Tokyo, Japon). l&#039;\u00e9paisseur \u00e9pith\u00e9liale corn\u00e9enne centrale a \u00e9t\u00e9 d\u00e9termin\u00e9e en divisant chaque corn\u00e9e en cinq sections.<\/p>\n<h3 id=\"Sec20\" class=\"c-article__sub-heading\">Coloration DAB pour analyse immunohistochimique (IHC)<\/h3>\n<p>Les tissus des glandes lacrymales de souris BALB\/c ont \u00e9t\u00e9 pr\u00e9lev\u00e9s et fix\u00e9s avec du formald\u00e9hyde 10%. Les tissus fixes des glandes lacrymales ont \u00e9t\u00e9 inclus en paraffine, sectionn\u00e9s (5 \u03bcm) et la paraffine a \u00e9t\u00e9 retir\u00e9e trois fois pendant 3 minutes \u00e0 l&#039;aide de xyl\u00e8ne (Junsei, Tokyo, Japon). Les coupes ont \u00e9t\u00e9 hydrat\u00e9es pendant 1 min dans de l&#039;\u00e9thanol 100, 95, 70 et 50%. L&#039;antig\u00e8ne de la glande lacrymale a \u00e9t\u00e9 extrait par micro-ondes avec un tampon TRIS \u2013 EDTA (pH 9,0). Apr\u00e8s avoir appliqu\u00e9 du peroxyde d&#039;hydrog\u00e8ne 3% sur des lames de tissus pendant 15 minutes, les coupes ont \u00e9t\u00e9 bloqu\u00e9es avec du 2% BSA pendant 1 h \u00e0 temp\u00e9rature ambiante. Les coupes ont \u00e9t\u00e9 trait\u00e9es pendant une nuit \u00e0 4 \u00b0 C avec CD45 (Bio-RAD, MCA 1258GT, dilution 1: 100). Apr\u00e8s lavage avec du PBS, les cellules ont \u00e9t\u00e9 trait\u00e9es pendant 2 h \u00e0 temp\u00e9rature ambiante avec des IgG-HRP anti-lapin (Santa Cruz Biotechnology, Dallas, TX, USA, SC-2357, dilution 1: 100) et color\u00e9es pendant 1 min avec 3, T\u00e9trachlorhydrate de 3\u2032-diaminobenzidine (Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA). Les lames ont \u00e9t\u00e9 color\u00e9es pendant 30 s \u00e0 l&#039;h\u00e9matoxyline et rinc\u00e9es \u00e0 l&#039;eau du robinet. Les tranches ont ensuite \u00e9t\u00e9 recouvertes d&#039;une lamelle et mont\u00e9es avec le milieu de montage Permount \u2122 (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA). Toutes les lames ont \u00e9t\u00e9 examin\u00e9es et photographi\u00e9es \u00e0 l&#039;aide d&#039;un microscope optique (Olympus, CX43, Olympus Optical Co., Tokyo, Japon). Logiciel ImageJ (version 1.53, National Institutes of Health, Bethesda, MD, USA)<sup><a id=\"ref-link-section-d165057339e1763\" title=\"Schneider, CA, Rasband, WS &amp; Eliceiri, KW NIH image vers ImageJ\u00a0: 25 ans d&#039;analyse d&#039;images. Nat. M\u00e9thodes 9, 671-675 (2012).\" href=\"http:\/\/www.nature.com\/articles\/s41598-022-23545-7#ref-CR48\" data-track=\"click\" data-track-action=\"reference anchor\" data-track-label=\"link\" data-test=\"citation-ref\" aria-label=\"R\u00e9f\u00e9rence 48\">48<\/a><\/sup> a \u00e9t\u00e9 utilis\u00e9 pour effectuer une analyse quantitative des donn\u00e9es.<\/p>\n<h3 id=\"Sec21\" class=\"c-article__sub-heading\">Culture cellulaire ARPE-19<\/h3>\n<p>Des cellules \u00e9pith\u00e9liales r\u00e9tiniennes humaines ARPE-19 (American Type Culture Collection, ATCC, Manassas, VA, USA) ont \u00e9t\u00e9 cultiv\u00e9es dans un milieu DMEM\/F-12 (Gibco, Carlsbad, CA, USA) additionn\u00e9 de FBS 10% (HyClone Laboratories, Logan, UT). , USA) et p\u00e9nicilline\/streptomycine 1% (HyClone Laboratories). Les cellules ont \u00e9t\u00e9 ensemenc\u00e9es \u00e0 une densit\u00e9 de 2 \u00d7 10<sup>5<\/sup> par puits dans des plaques \u00e0 6 puits et cultiv\u00e9s pour induire une r\u00e9ponse inflammatoire et endoplasmique.<\/p>\n<h3 id=\"Sec22\" class=\"c-article__sub-heading\">Viabilit\u00e9 cellulaire<\/h3>\n<p>L&#039;effet de <i>T. lutea<\/i> La viabilit\u00e9 cellulaire a \u00e9t\u00e9 \u00e9valu\u00e9e par le test MTT comme d\u00e9crit dans l&#039;\u00e9tude pr\u00e9c\u00e9dente.<sup><a id=\"ref-link-section-d165057339e1788\" title=\"Yu, HS, Kim, W.-J., Bae, W.-Y., Lee, N.-K. &amp; Paik, H.-D. Inula britannica inhibe l&#039;adipogen\u00e8se des pr\u00e9adipocytes 3T3-L1 via la modulation de l&#039;expansion clonale mitotique impliquant les voies de signalisation ERK 1\/2 et akt. Nutriments 12, 3037 (2020).\" href=\"http:\/\/www.nature.com\/articles\/s41598-022-23545-7#ref-CR49\" data-track=\"click\" data-track-action=\"reference anchor\" data-track-label=\"link\" data-test=\"citation-ref\" aria-label=\"R\u00e9f\u00e9rence 49\">49<\/a><\/sup> mais avec de l\u00e9g\u00e8res modifications. Les cellules ont \u00e9t\u00e9 \u00e9tal\u00e9es dans des plaques de culture \u00e0 96 puits \u00e0 une densit\u00e9 de 1,5 \u00d7 10<sup>4<\/sup> cellules\/puits et incub\u00e9 pendant 24 h. Les cellules ont ensuite \u00e9t\u00e9 trait\u00e9es avec diverses concentrations de <i>T. lutea<\/i> et incub\u00e9 pendant 24 h suppl\u00e9mentaires. Le surnageant de chaque puits a \u00e9t\u00e9 remplac\u00e9 par un milieu de croissance frais contenant 0,5 mg\/mL de MTT et incub\u00e9 pendant 1 h. Le surnageant a \u00e9t\u00e9 \u00e9limin\u00e9 et les d\u00e9p\u00f4ts de formazan g\u00e9n\u00e9r\u00e9s ont \u00e9t\u00e9 dissous dans 200 \u00b5L de dim\u00e9thylsulfoxyde. L&#039;absorbance a \u00e9t\u00e9 mesur\u00e9e \u00e0 570 nm. La viabilit\u00e9 cellulaire a \u00e9t\u00e9 relativement calcul\u00e9e en pourcentage par rapport aux groupes t\u00e9moins n\u00e9gatifs.<\/p>\n<h3 id=\"Sec23\" class=\"c-article__sub-heading\">Analyse par Western Blot<\/h3>\n<p>Un Western blot a \u00e9t\u00e9 r\u00e9alis\u00e9 pour d\u00e9terminer les voies de signalisation cellulaire sous-jacentes \u00e0 l&#039;effet anti-inflammatoire de <i>T. lutea<\/i> comme d\u00e9crit pr\u00e9c\u00e9demment dans l&#039;\u00e9tude<sup><a id=\"ref-link-section-d165057339e1808\" title=\"Yu, HS, Kim, W.-J., Bae, W.-Y., Lee, N.-K. &amp; Paik, H.-D. Inula britannica inhibe l&#039;adipogen\u00e8se des pr\u00e9adipocytes 3T3-L1 via la modulation de l&#039;expansion clonale mitotique impliquant les voies de signalisation ERK 1\/2 et akt. Nutriments 12, 3037 (2020).\" href=\"http:\/\/www.nature.com\/articles\/s41598-022-23545-7#ref-CR49\" data-track=\"click\" data-track-action=\"reference anchor\" data-track-label=\"link\" data-test=\"citation-ref\" aria-label=\"R\u00e9f\u00e9rence 49\">49<\/a><\/sup>, mais avec des modifications mineures. Les cellules confluentes ARPE-19 ont \u00e9t\u00e9 priv\u00e9es de nourriture dans du DMEM: F12 contenant des antibiotiques 1% FBS et 1% pendant 24 h. Les cellules ont ensuite \u00e9t\u00e9 trait\u00e9es avec <i>T. lutea<\/i> (50 et 100 \u00b5g\/mL) pendant 2 h puis stimul\u00e9e avec 20 ng\/mL de TNF-\u03b1 pendant 15 min. Les cellules ont \u00e9t\u00e9 rinc\u00e9es trois fois avec du DPBS glac\u00e9, puis lys\u00e9es dans un tampon d&#039;extraction de prot\u00e9ines (iNtRON Biotechnology, Gyeonggi-do, Cor\u00e9e) compl\u00e9t\u00e9 par un cocktail d&#039;inhibiteurs de prot\u00e9ase et de phosphatase. Les surnageants de lysats ont \u00e9t\u00e9 obtenus par centrifugation (14 000\u00d7<i>g<\/i>, 30 min, 4 \u00b0 C) et leur concentration en prot\u00e9ines a \u00e9t\u00e9 estim\u00e9e \u00e0 l&#039;aide d&#039;un kit de dosage de prot\u00e9ines DCTM (Bio-Rad, Hercules, CA, USA). Des quantit\u00e9s \u00e9gales (15 \u00e0 25 \u00b5g) de prot\u00e9ines cellulaires ont \u00e9t\u00e9 s\u00e9par\u00e9es par SDS-PAGE et transf\u00e9r\u00e9es sur des membranes PVDF. Les membranes ont \u00e9t\u00e9 incub\u00e9es avec de l&#039;albumine s\u00e9rique bovine 5% ou du lait \u00e9cr\u00e9m\u00e9, puis avec une dilution au 1: 2000 d&#039;anticorps primaires (anti-phopho-ERK, anti-ERK, anti-phospho-JNK, anti-JNK, anti-phospho-p38). , anti-p38, anti-phospho-AKT, anti-AKT, anti-phospho-I\u03baB-\u03b1, anti-I\u03baB-\u03b1, anti-phospho-p65, anti-p65, anti-\u03b1-tubuline et anti-\u03b2-action ) \u00e0 4 \u00b0C et 12 h. Les membranes ont ensuite \u00e9t\u00e9 rinc\u00e9es avec du TBS-T et trait\u00e9es 1 h \u00e0 temp\u00e9rature ambiante avec des anticorps secondaires anti-lapin conjugu\u00e9s \u00e0 la HRP \u00e0 une dilution de 1:10 000. Les bandes de prot\u00e9ines ont \u00e9t\u00e9 d\u00e9tect\u00e9es \u00e0 l&#039;aide du substrat de sensibilit\u00e9 maximale SuperSignal West Femto (Thermo Fisher Scientific) et visualis\u00e9es dans un syst\u00e8me de documentation sur gel iBright CL1000 (Thermo Fisher Scientific). La densit\u00e9 de chaque transfert de prot\u00e9ine a \u00e9t\u00e9 d\u00e9termin\u00e9e \u00e0 l&#039;aide du logiciel Image J (version 1.53, NIH)<sup><a id=\"ref-link-section-d165057339e1818\" title=\"Schneider, CA, Rasband, WS &amp; Eliceiri, KW NIH image vers ImageJ\u00a0: 25 ans d&#039;analyse d&#039;images. Nat. M\u00e9thodes 9, 671-675 (2012).\" href=\"http:\/\/www.nature.com\/articles\/s41598-022-23545-7#ref-CR48\" data-track=\"click\" data-track-action=\"reference anchor\" data-track-label=\"link\" data-test=\"citation-ref\" aria-label=\"R\u00e9f\u00e9rence 48\">48<\/a><\/sup>.<\/p>\n<h3 id=\"Sec24\" class=\"c-article__sub-heading\">Extraction totale des AGPI de <i>T. lutea<\/i><\/h3>\n<p>Les AGPI totaux ont \u00e9t\u00e9 extraits de <i>T. lutea<\/i> en utilisant la technique Folch<sup><a id=\"ref-link-section-d165057339e1837\" title=\"Qian, SY, Wang, HP, Schafer, FQ &amp; Buettner, GR D\u00e9tection EPR des radicaux libres d\u00e9riv\u00e9s des lipides provenant des AGPI, des LDL et des oxydations cellulaires. Biol radical libre. M\u00e9d. 29, 568-579 (2000).\" href=\"http:\/\/www.nature.com\/articles\/s41598-022-23545-7#ref-CR50\" data-track=\"click\" data-track-action=\"reference anchor\" data-track-label=\"link\" data-test=\"citation-ref\" aria-label=\"R\u00e9f\u00e9rence 50\">50<\/a><\/sup>. En bref, 100 mg de l&#039;\u00e9chantillon ont \u00e9t\u00e9 plac\u00e9s dans un flacon contenant 5 ml de CH<sub>3<\/sub>Solution Cl:MeOH (2:1, v\/v) et ultrasoniqu\u00e9e pendant 15 min. La suspension a \u00e9t\u00e9 clarifi\u00e9e par centrifugation \u00e0 10 000 tr\/min pendant 5 min. N \/ A<sub>2<\/sub>DONC<sub>4<\/sub> a \u00e9t\u00e9 ajout\u00e9 au surnageant qui a ensuite \u00e9t\u00e9 filtr\u00e9 pour \u00e9liminer toute eau restante. Cette \u00e9tape a \u00e9t\u00e9 r\u00e9p\u00e9t\u00e9e encore deux fois. La solution a ensuite \u00e9t\u00e9 concentr\u00e9e sous azote gazeux pour obtenir des lipides d\u2019algues purs.<\/p>\n<h3 id=\"Sec25\" class=\"c-article__sub-heading\">M\u00e9thylation des acides gras<\/h3>\n<p>La m\u00e9thylation des acides gras a \u00e9t\u00e9 r\u00e9alis\u00e9e pour pr\u00e9parer des \u00e9chantillons de lipides pour l&#039;analyse par chromatographie en phase gazeuse (GC). Le mat\u00e9riau extrait a \u00e9t\u00e9 ajout\u00e9 \u00e0 un flacon de 10 ml, suivi de 1 ml d&#039;un m\u00e9lange NaOH:MeOH 0,5 N. Cette solution contient 400 \u03bcg\/mL d&#039;\u00e9talon interne (acide val\u00e9rique). Le m\u00e9lange a \u00e9t\u00e9 agit\u00e9 pendant 30 secondes, puis incub\u00e9 pendant 20 minutes \u00e0 80 \u00b0C. Le m\u00e9lange a ensuite \u00e9t\u00e9 refroidi \u00e0 temp\u00e9rature ambiante pendant 5 min, puis 2 ml de trifluorure de bore : MeOH ont \u00e9t\u00e9 ajout\u00e9s, puis agit\u00e9s pendant 30 s. Le m\u00e9lange a \u00e9t\u00e9 incub\u00e9 pendant 20 min \u00e0 80 \u00b0C suivi d&#039;un refroidissement pendant 10 min. Un volume de 2 ml de NaCl sursatur\u00e9 a \u00e9t\u00e9 ajout\u00e9 pour induire la s\u00e9paration des phases et la collecte des acides gras. Ensuite, 1,5 ml de <i>n<\/i>De l&#039;hexane a \u00e9t\u00e9 ajout\u00e9 et le m\u00e9lange a \u00e9t\u00e9 vortex\u00e9 pendant 30 s avant de refroidir \u00e0 temp\u00e9rature ambiante pendant 20 min. Les couches ont \u00e9t\u00e9 s\u00e9par\u00e9es et le surnageant liquide a \u00e9t\u00e9 retir\u00e9 du m\u00e9lange et l&#039;eau a \u00e9t\u00e9 compl\u00e8tement \u00e9limin\u00e9e \u00e0 l&#039;aide d&#039;un Na satur\u00e9.<sub>2<\/sub>DONC<sub>4<\/sub> filtre.<\/p>\n<h3 id=\"Sec26\" class=\"c-article__sub-heading\">Identification des acides gras<\/h3>\n<p>Les esters m\u00e9thyliques d&#039;acides gras (FAME) ont \u00e9t\u00e9 examin\u00e9s \u00e0 l&#039;aide d&#039;un GC \u00e9quip\u00e9 d&#039;un d\u00e9tecteur \u00e0 ionisation de flamme (FID\u00a0; Agilent 7890A, Agilent Technologies, Wilmington, DE, USA). Des \u00e9chantillons (1 \u00b5L) ont \u00e9t\u00e9 inject\u00e9s dans la colonne HP-88 du GC (J&amp;W 112-88A7, Agilent Technologies, Wilmington, DE, USA) (100 m \u00d7 250 \u00b5m ID, film de 0,2 \u00b5m). L&#039;analyse GC a \u00e9t\u00e9 r\u00e9alis\u00e9e comme suit : les \u00e9chantillons ont \u00e9t\u00e9 initialement maintenus \u00e0 140 \u00b0C pendant 5 min, puis la temp\u00e9rature a \u00e9t\u00e9 augment\u00e9e \u00e0 4 \u00b0C\/min jusqu&#039;\u00e0 240 \u00b0C pendant 15 min. Le d\u00e9bit de la colonne a \u00e9t\u00e9 fix\u00e9 \u00e0 1 mL\/min. De l&#039;azote gazeux a \u00e9t\u00e9 utilis\u00e9 comme gaz porteur pour l&#039;analyse, le FID a \u00e9t\u00e9 r\u00e9gl\u00e9 \u00e0 280 \u00b0C et le rapport de division \u00e9tait de 30\u00a0:\u00a01. Les FAME ont \u00e9t\u00e9 identifi\u00e9s en les comparant aux normes connues. Chaque \u00e9chantillon a \u00e9t\u00e9 mesur\u00e9 par analyse GC en triple.<\/p>\n<h3 id=\"Sec27\" class=\"c-article__sub-heading\">analyses statistiques<\/h3>\n<p>Toutes les donn\u00e9es ont \u00e9t\u00e9 analys\u00e9es statistiquement en utilisant une ANOVA unidirectionnelle avec l&#039;analyse post-hoc de Tukey par SPSS version 18.0 (IBM Co., Armonk, NY, USA). Au moins trois r\u00e9p\u00e9titions ind\u00e9pendantes ont \u00e9t\u00e9 r\u00e9alis\u00e9es pour chaque exp\u00e9rience.<\/p>\n<\/div>\n<p>[annonce_2]<\/p>\n<p><a href=\"https:\/\/www.nature.com\/articles\/s41598-022-23545-7\">Lien source <\/a><\/p>","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>The prevalence of dry eye syndrome (DES) has increased worldwide, affecting around 50% of all adults1. DES is a multifactorial ocular surface disease characterized by tear film instability and hyperosmolarity, ocular surface inflammation and damage, neurosensory abnormalities<\/p>","protected":false},"author":1,"featured_media":5363,"comment_status":"open","ping_status":"open","sticky":false,"template":"","format":"standard","meta":{"site-sidebar-layout":"default","site-content-layout":"","ast-site-content-layout":"default","site-content-style":"default","site-sidebar-style":"default","ast-global-header-display":"","ast-banner-title-visibility":"","ast-main-header-display":"","ast-hfb-above-header-display":"","ast-hfb-below-header-display":"","ast-hfb-mobile-header-display":"","site-post-title":"","ast-breadcrumbs-content":"","ast-featured-img":"","footer-sml-layout":"","theme-transparent-header-meta":"default","adv-header-id-meta":"","stick-header-meta":"","header-above-stick-meta":"","header-main-stick-meta":"","header-below-stick-meta":"","astra-migrate-meta-layouts":"set","ast-page-background-enabled":"default","ast-page-background-meta":{"desktop":{"background-color":"var(--ast-global-color-4)","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""},"tablet":{"background-color":"","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""},"mobile":{"background-color":"","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""}},"ast-content-background-meta":{"desktop":{"background-color":"var(--ast-global-color-5)","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""},"tablet":{"background-color":"var(--ast-global-color-5)","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""},"mobile":{"background-color":"var(--ast-global-color-5)","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""}},"footnotes":""},"categories":[9],"tags":[],"class_list":["post-4903","post","type-post","status-publish","format-standard","has-post-thumbnail","hentry","category-supplements"],"_links":{"self":[{"href":"https:\/\/directcm.com\/fr\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/4903","targetHints":{"allow":["GET"]}}],"collection":[{"href":"https:\/\/directcm.com\/fr\/wp-json\/wp\/v2\/posts"}],"about":[{"href":"https:\/\/directcm.com\/fr\/wp-json\/wp\/v2\/types\/post"}],"author":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/directcm.com\/fr\/wp-json\/wp\/v2\/users\/1"}],"replies":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/directcm.com\/fr\/wp-json\/wp\/v2\/comments?post=4903"}],"version-history":[{"count":1,"href":"https:\/\/directcm.com\/fr\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/4903\/revisions"}],"predecessor-version":[{"id":5393,"href":"https:\/\/directcm.com\/fr\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/4903\/revisions\/5393"}],"wp:featuredmedia":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/directcm.com\/fr\/wp-json\/wp\/v2\/media\/5363"}],"wp:attachment":[{"href":"https:\/\/directcm.com\/fr\/wp-json\/wp\/v2\/media?parent=4903"}],"wp:term":[{"taxonomy":"category","embeddable":true,"href":"https:\/\/directcm.com\/fr\/wp-json\/wp\/v2\/categories?post=4903"},{"taxonomy":"post_tag","embeddable":true,"href":"https:\/\/directcm.com\/fr\/wp-json\/wp\/v2\/tags?post=4903"}],"curies":[{"name":"wp","href":"https:\/\/api.w.org\/{rel}","templated":true}]}}